Νέα διαγνωστική εξάρτηση νουκλεϊνικού οξέος Κοροναβίρη (2019-nCoV)
(PCR-φθορισμός που εξετάζει)
Προοριζόμενη χρήση
Η νέα διαγνωστική εξάρτηση νουκλεϊνικού οξέος Κοροναβίρη (2019-nCoV) (PCR-φθορισμός που εξετάζει) χρησιμοποιείται για την ποιοτική ανίχνευση των γονιδίων ORF1ab και Ν του νέου Κοροναβίρη (2019-nCoV) στη nasopharyngeal πατσαβούρα, τη oropharyngeal πατσαβούρα, το φατνιακό ρευστό πλυσιμάτων, το πτύελο, τον ορό, ολόκληρο το αίμα και τα περιττώματα από τις πιθανές περιπτώσεις πνευμονίας με τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη, τους ασθενείς με τις πιθανές συστάδες της νέας μόλυνσης Κοροναβίρη, και άλλους ασθενείς που απαιτούν τη διάγνωση ή τη διαφορική διάγνωση της νέας μόλυνσης Κοροναβίρη.
Για τη τεχνητή διαγνωστική χρήση μόνο. Για την επαγγελματική χρήση μόνο.
Περίληψη
Οι ορισμοί των «πιθανών περιπτώσεων» και οι «πιθανές συστάδες των ασθενών» θα καθοριστούν αναφορικά με στο «πρόγραμμα διαγνώσεων και θεραπείας πνευμονίας για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη» και «το πρόγραμμα ελέγχου περίπτωσης πνευμονίας για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη» που εκδίδεται από το CDC της Κίνας (το currentversion).
Η νέα διαγνωστική εξάρτηση νουκλεϊνικού οξέος Κοροναβίρη (2019-nCoV) (PCR-φθορισμός που εξετάζει) χρησιμοποιείται μόνο για τη βοηθητική διάγνωση των σχετικών περιπτώσεων και η επιφύλαξη έκτακτης ανάγκης για τη τεχνητή διάγνωση κατά τη διάρκεια του ξεσπάσματος πνευμονίας της νέας μόλυνσης Κοροναβίρη (2019-nCoV) από December2019, αυτή η εξάρτηση δεν πρέπει να χρησιμοποιηθεί όπως στερεότυπος τεχνητός διαγνωστική στην κλινική πρακτική.
Παρακαλώ ακολουθήστε τις σχετικές απαιτήσεις του «προγράμματος διαγνώσεων και θεραπείας πνευμονίας για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη», «πρόληψης πνευμονίας πρόγραμμα και ελέγχου για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη» και άλλα έγγραφα σε λειτουργία.
Οι νέες δοκιμές νουκλεϊνικού οξέος Κοροναβίρη πρέπει να συμμορφωθούν με τις «τεχνικές οδηγίες για την εργαστηριακή δοκιμή νέου Κοροναβίρη στο CDC της Κίνας» και να κρατήσουν καλό biosafety.
Αρχή δοκιμής
Με την εφαρμογή της σε πραγματικό χρόνο ποσοτικής τεχνολογίας rt-pcr φθορισμού στο ποσοτικό PCR φθορισμού όργανο, αυτή η δοκιμή χρησιμοποιεί το νέο Κοροναβίρη (2019-nCoV) ORF1ab και τη συγκεκριμένη συντηρημένη ακολουθία πρωτεϊνικού Ν γονιδίου κωδικοποίησης nucleocapsid καθώς οι περιοχές στόχων που σχεδιάζονται για τη συντηρημένη ακολουθία των γονιδίων διπλός-στόχων, για να επιτύχουν την ανίχνευση του RNA δειγμάτων μέσω του φθορισμού σήματος αλλάζουν.
Το PCR σύστημα ανίχνευσης χρησιμοποιεί το θετικό εσωτερικό έλεγχο, που ελέγχει την παρουσία PCR ανασταλτικών παραγόντων στα δείγματα δοκιμής με την ανίχνευση εάν το σήμα εσωτερικού ελέγχου είναι κανονικό, να αποφύγει ένα ψεύτικο αρνητικό αποτέλεσμα.
Συστατικά της διαγνωστικής εξάρτησης
Αυτή η εξάρτηση είναι ένα αντιδραστήριο αντίδρασης ενίσχυσης και περιέχει τα ακόλουθα συστατικά:
| Αριθ. |
Όνομα αντιδραστηρίων |
Προδιαγραφή. & Qty |
Κύρια συστατικά |
| 24 Τ |
48 Τ |
| 1 |
2019-nCov-PCR μίγμα |
624µL/tube Χ 1 |
1248µL/tube Χ 1 |
Πρωθυπουργοί (4,62%), έλεγχοι (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%),
PCR απομονωτής (89,13%)
|
| 2 |
2019-nCov-PCR-ένζυμο μίγμα |
96µL/tube Χ 1 |
192µL/tube Χ 1 |
RT ένζυμο (62,5%),
Ένζυμο Taq (37,5%)
|
| 3 |
2019-nCov-PCR-θετικός έλεγχος |
500µL/tube Χ 1 |
500µL/tube Χ 1 |
Τεχνητό μεταγραφικό RNA που περιέχει τα γονίδια στόχων (γονίδιο ORF1 αβ, Ν) και τα εσωτερικά τυποποιημένα τεμάχια γονιδίων (Rnase Π) |
| 4 |
2019-nCov-PCR-αρνητικός έλεγχος |
500µL/tube Χ 1 |
500µL/tube Χ 1 |
Κανονικός αλατούχος |
Απαιτήσεις δειγμάτων
1. Εφαρμόσιμος τύπος δειγμάτων: nasopharyngeal πατσαβούρα, oropharyngeal πατσαβούρα, φατνιακό ρευστό πλυσιμάτων, πτύελο, ορός, ολόκληρο αίμα και περιττώματα.
2. Συλλογή του δείγματος
Nasopharyngeal πατσαβούρα/oropharyngeal πατσαβούρα: Συλλέξτε το δείγμα σύμφωνα με τις σχετικές διατάξεις " μεθόδου συλλογής δειγμάτων» στο «εργαστηριακό τεχνικό οδηγό πνευμονίας για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη» από «το σχέδιο πρόληψης και ελέγχου πνευμονίας για τη νέα μόλυνση Κοροναβίρη». Αποδεικνύεται ότι η πατσαβούρα φιαγμένη από νάυλον κεφάλι δειγματοληψίας και ράβδο δειγματοληψίας ABS μπορεί να επιλεχτεί για τη συλλογή δειγμάτων.
Nasopharyngeal πατσαβούρα: Ο σωλήνας συλλογής δειγμάτων πρέπει να κολληθεί με το γραμμωτό κώδικα πρώτα, η nasopharyngeal πατσαβούρα πρέπει να συλλεχθεί ημέρες within3 μετά από την αρχή της ασθένειας όσο το δυνατόν περισσότερο. Χρησιμοποιήστε την πατσαβούρα για να μετρήσετε το μήκος μεταξύ του nasi κορυφών και earlobe, κατόπιν σημάδι με το δάχτυλο. Παρεμβάλτε την πατσαβούρα στη ρινική κοιλότητα στην κατεύθυνση της καθέτου στη μύτη (πρόσωπο). Η πατσαβούρα πρέπει να είναι τουλάχιστον μισό του μήκους από το earlobe στο nasi κορυφών. Κάνετε τις στάσεις πατσαβουρών στη ρινική δεκαετία του '30 for15 ~, ήπια rotate3 ~ 5 φορές, γρήγορα τεθειμένη πατσαβούρα στον απομονωτή λύσης σωλήνων cotaining2 μιλ. συλλογής δειγμάτων (όπως τον απομονωτή λύσης στο αντιδραστήριο απελευθέρωσης δειγμάτων) ή αντιδραστήριο αποθήκευσης δειγμάτων που περιέχει τον ενζυμικό ανασταλτικό παράγοντα RNA. Παρεμβάλτε την πατσαβούρα, κατόπιν σπάσιμο που η αποστειρωμένη ράβδος πατσαβουρών κοντά στην κορυφή, σφίγγει το σωλήνα ΚΑΠ και τη σφραγίδα με τη σφράγιση της ταινίας.
Oropharyngeal πατσαβούρα: Ο σωλήνας συλλογής δειγμάτων πρέπει να κολληθεί με το γραμμωτό κώδικα πρώτα, η oropharyngeal πατσαβούρα πρέπει να συλλεχθεί μέσα σε 3 ημέρες μετά από την αρχή της ασθένειας όσο το δυνατόν περισσότερο. Μια αποστειρωμένη πατσαβούρα συγκέντρωσης πρέπει να χρησιμοποιηθεί για τη δειγματοληψία, να σκουπίσει συγκρατημένα το μεταγενέστερο pharyngeal τοίχο, αποφεύγει τη γλώσσα. Γρήγορα τοποθετήστε μια αποστειρωμένη πατσαβούρα στο σωλήνα συλλογής που χρησιμοποιείται για τη συλλογή της oropharyngeal πατσαβούρας. Σπάστε την αποστειρωμένη ράβδο πατσαβουρών κοντά στην κορυφή, σφίγξτε το σωλήνα ΚΑΠ και τη σφραγίδα με τη σφράγιση της ταινίας.
Φατνιακό ρευστό πλυσιμάτων: Αυστηροί ασθενείς ή ασθενείς με την πνευμονία που προχωρούν γρήγορα. Νοσοκομειακός γιατρός extract≥5ml BALF σε ένα αποστηρωμένο εμπορευματοκιβώτιο 50ml που ονομάζεται με το γραμμωτό κώδικα δειγμάτων και την κεφαλή κοχλίου από την αποστηρωμένη λειτουργία. Συλλέξτε το δείγμα, κατόπιν σφίγξτε το σωλήνα ΚΑΠ και τη σφραγίδα με τη σφράγιση της ταινίας.
Πτύελο:
Ο σωλήνας συλλογής δειγμάτων πρέπει να κολληθεί με το γραμμωτό κώδικα πρώτα. Μην ανοίξτε τον εναέριο διάδρομο για να συλλέξετε τα δείγματα κατά τη συλλογή του πτύελου. Το πτύελο βήχα Collect.deep σε ένα μίας χρήσης αποστηρωμένο φλυτζάνι δειγματοληψίας με την κεφαλή κοχλίου, φορτώνει την πρωτεάση Κ 2 μιλ. (1g/L) στο φλυτζάνι δειγματοληψίας. Συλλέξτε το πτύελο, κατόπιν σφίγξτε το σωλήνα ΚΑΠ και τη σφραγίδα με τη σφράγιση της ταινίας. Στείλετε στην ανίχνευση μέσα σε 30 λ. όσο το δυνατόν περισσότερο. Η πρωτεάση Κ δεν πρέπει να προστεθεί πρώτα εάν τα δείγματα πρέπει να μεταφερθούν πέρα από τις μεγάλες αποστάσεις.
Ολόκληρο αίμα:
Τα δείγματα αίματος μπορούν να συλλεχθούν μέσα σε 7 ημέρες μετά από την αρχή ή τους κρίσιμους ασθενείς, ή τους ασθενείς που εξετάζονται με την ιαιμία. Ο σωλήνας συλλογής δειγμάτων πρέπει να κολληθεί με το γραμμωτό κώδικα πρώτα. Συλλέξτε 2~4ml των δειγμάτων αίματος στον κενό σωλήνα συλλογής αίματος που περιέχει EDTA το αντιπηκτικό.
Περιττώματα:
Για τους ασθενείς με τα γαστροεντερικά συμπτώματα όπως η διάρροια στο πρώτο στάδιο της ασθένειας, περιττώματα κονσερβών 3~5g (μέγεθος σόγιας). Ο σωλήνας συλλογής δειγμάτων πρέπει να κολληθεί με το γραμμωτό κώδικα πρώτα. Συλλέξτε το δείγμα στο σωλήνα συλλογής δειγμάτων με την κεφαλή κοχλίου που περιέχει 2ml που κανονικός αλατούχος (ενζυμικός ανασταλτικός παράγοντας το RNA μπορεί να προστεθεί όταν άδεια όρων) έπειτα σφραγίζει με τη σφράγιση της ταινίας.
Μετά από τη συλλογή δειγμάτων, συστήνεται να τοποθετήσει στο αντιδραστήριο αποθήκευσης δειγμάτων για τη συντήρηση.
Έχει αποδειχθεί ότι η λύση συντήρησης, όπως κανονικός αλατούχος, απομονωτής TE, 24M που περιέχει guanidine (όπως guanidine το υδροχλωρίδιο) μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως αντιδραστήριο αποθήκευσης δειγμάτων για τη συντήρηση δειγμάτων. Το αντιδραστήριο αποθήκευσης δειγμάτων που περιέχει guanidine δεν μπορεί να προσαρμοστεί άμεσα στο αντιδραστήριο απελευθέρωσης δειγμάτων που κατασκευάζεται από Sansure Biotech την Α.Ε. για την εξαγωγή νουκλεϊνικού οξέος. Εάν είναι απαραίτητο, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί η εξάρτηση εξαγωγής ή καθαρισμού νουκλεϊνικού οξέος (DNA/RNA) (μαγνητική μέθοδος χαντρών) (αριθμός αναφοράς: S1002E) κατασκευασμένος από Sansure Biotech την Α.Ε. ή την προερχόμενη από ιό μίνι εξάρτηση RNA QIAamp (50) που κατασκευάζεται από QIAGEN για την εξαγωγή νουκλεϊνικού οξέος.
3. Αποθήκευση και παράδοση των δειγμάτων:
Τα δείγματα που εξετάζονται μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία αμέσως, τα δείγματα που εξετάζονται μέσα σε 24 ώρες μπορούν να αποθηκευτούν σε 4℃. Τα δείγματα που δεν μπορούν να ανιχνευθούν μέσα σε 24 ώρες πρέπει να αποθηκευτούν σε -70℃ ή κατωτέρω (ελλείψει των όρων αποθήκευσης -70℃, τα δείγματα που εξετάζονται μπορούν να αποθηκευτούν σε -20℃ για 10 ημέρες, το νουκλεϊνικό οξύ μπορεί να αποθηκευτεί σε -20±5℃ για 15 ημέρες). Οι πολλαπλάσιοι κύκλοι παγώματος/thaw πρέπει να αποφευχθούν. Τα δείγματα πρέπει να μεταφερθούν σε μια σφραγισμένη παγωμένη στάμνα με τον πάγο ή σε ένα σφραγισμένο κιβώτιο αφρού με τον πάγο. Η αδρανοποίηση των δειγμάτων σε 56℃ για 30min δεν έχει επιπτώσεις στην ανίχνευση αυτής της εξάρτησης.
Ανάλυση αποτελέσματος (αναφερθείτε στο εγχειρίδιο χρηστών του οργάνου για να ρυθμίσετε τις τοποθετήσεις.)
Τα αποτελέσματα θα σωθούν αυτόματα όταν ολοκληρώνονται οι αντιδράσεις. Αναλύστε την καμπύλη ενίσχυσης του στόχου της ανίχνευσης και του εσωτερικού ελέγχου. Ρυθμίστε τις τιμές έναρξης, τελών και κατώτατων ορίων της βασικής γραμμής της γραφικής παράστασης σύμφωνα με το αποτέλεσμα ανάλυσης (οι χρήστες μπορούν να ρυθμίσουν τις τιμές σύμφωνα με την πραγματική κατάσταση. Η αξία έναρξης μπορεί να τεθεί μεταξύ 3-15, και της αξίας τελών μεταξύ 5-20. Ρυθμίστε την καμπύλη ενίσχυσης του αρνητικού ελέγχου για να είστε επίπεδος ή κάτω από το κατώτατο όριο). Χτυπήστε «Analyze» για να εφαρμόσετε την ανάλυση, σιγουρεύεται ότι κάθε παράμετρος ικανοποιεί τις απαιτήσεις που δίνονται στο «ποιοτικό έλεγχο». Πηγαίνετε «να καλύψετε» το παράθυρο για να καταγράψει τα ποιοτικά αποτελέσματα.
Ποιοτικός έλεγχος
| Στοιχείο |
2019-nCoV-PCR-αρνητικός έλεγχος |
2019-nCoV-PCR-θετικός έλεγχος |
| Αξία CT |
Κανένα CT ή CT > 40 στο κανάλι FAM, ROX και ΔΕΚΑΕΞΑΔΙΚΌ
(Εσωτερικός έλεγχος)
|
≤ 35 στο κανάλι FAM, ROX και ΔΕΚΑΕΞΑΔΙΚΌ
(Εσωτερικός έλεγχος)
|
Το αποτέλεσμα της δοκιμής αντιμετωπίζεται όπως έγκυρο εάν όλοι οι όροι στον προαναφερθε'ντα ικανοποιούνται για την ίδια δοκιμή. Διαφορετικά το αποτέλεσμα της δοκιμής αντιμετωπίζεται ως άκυρο και πρέπει να επανελεγχεί.
Εξήγηση του αποτελέσματος ανίχνευσης
| Συμπέρασμα |
Αποτελέσματα ενίσχυσης |
| 2019-nCoV θετικό |
Υπάρχει χαρακτηριστική καμπύλη ενίσχυσης s-μορφής που ανιχνεύονται στο κανάλι FAM ή/και ROX, και η καμπύλη ενίσχυσης που ανιχνεύεται στο κανάλι ΔΕΚΑΕΞΑΔΙΚΟΎ, Ct≤40. |
| 2019-nCoV αρνητικός |
Δεν υπάρχει καμία χαρακτηριστική καμπύλη ενίσχυσης s-μορφής (κανένα CT) ή CT > 40 που ανιχνεύονται στο κανάλι FAM και ROX, και η καμπύλη ενίσχυσης που ανιχνεύεται στο κανάλι ΔΕΚΑΕΞΑΔΙΚΟΎ, CT ≤ 40. |
Δεν υπάρχει καμία χαρακτηριστική καμπύλη ενίσχυσης s-μορφής που ανιχνεύεται στο κανάλι FAM, ROX και ΔΕΚΑΕΞΑΔΙΚΟΎ (κανένα CT), ή οι CT > 40. Είναι υποδειγμένο ότι η συγκέντρωση του δείγματος είναι πάρα πολύ χαμηλή, ή υπάρχουν παρεμβαίνοντας ουσίες που εμποδίζουν την αντίδραση. Το αποτέλεσμα της δοκιμής είναι άκυρο. Μια έρευνα πρέπει να εκτελεσθεί για να ανακαλύψει και να αποκλείσει τους λόγους, παρακαλώ να συλλέξει το δείγμα πάλι και να επανελέγξει τα δείγματα.
Σημείωση: Για τους πολιτισμούς ιών, δεν υπάρχει καμία απαίτηση για τα αποτελέσματα δοκιμής εσωτερικού ελέγχου.
Αποθήκευση και σταθερότητα
1. Η διαγνωστική εξάρτηση πρέπει να αποθηκευτεί σε μια σφραγισμένη σακούλα -20±5°C και να προστατευθεί από το φως. Η εξάρτηση ισχύει προσωρινά για 6 μήνες.
2. Παρακαλώ αναφερθείτε στην ημερομηνία της ημερομηνίας κατασκευής και λήξης στην εξωτερική συσκευασία.
3. Τα αντιδραστήρια κρατούν έγκυρος και σταθερός μέσα στην ημερομηνία λήξης εάν όχι χρησιμοποιημένος. Εφ' όσον ανοίγουν το εμπορευματοκιβώτιο του αντιδραστηρίου, οι κύκλοι παγώματος/thaw δεν πρέπει να υπερβούν τρία.
Συμβατό όργανο
Η διαγνωστική εξάρτηση ισχύει σε slan-96P, ABI7500, τεχνολογίες QuantStudio TM5, RocheCobas480, μΑ-6000PCR ζωήςόργανο.
Το μήνυμά σας πρέπει να αποτελείται από 20-3.000 χαρακτήρες!
